Analyse morphométrique des lysosomes: marqueurs de transformation cellulaire de l’épithélium mammaire

Rev Chil obsteau au gynécol 2009; 74 (2): 83-87

Travaux d’origine

Analyse morphométrique des lysosomes: marqueurs de transformation cellulaire de l’épithélium mammaire

Ricardo Cornejo U. A

Département des sciences de base, Faculté de médecine, Université de Frontera, Temuco.
un biologiste cellulaire, PhD.

Résumé

Arrière-plans: La transformation des cellules est le mécanisme résultant de la puissante action générée par des gènes transformants sur une cellule normale, qui avec l’expression conséquente des oncoprotéines déterminent des changements radicaux dans la morphologie et les volumes de composants cellulaires, générant une cellule avec des fonctionnalités différentes. OBJECTIF: Spécifier les modifications qui caractérisent le mécanisme transférable dans les cellules d’épithélium mammaire transfectées avec le RAS OnCoge (HC1RA) par rapport à son type de cellule normal (HC11GM). Méthode: La microscopie électronique de transmission a été étudiée en appliquant des techniques morphométriques à ces types de cellules en mettant l’accent sur les lysosomes, les variations de taper de l’organisme responsables de la digestion cellulaire. Résultats: Tous les paramètres lysosomaux évalués dans le type de cellule transformé présentent des différences significatives en ce qui concerne la cellule normale. Conclusion: Les modifications radicales rencontrées par les lysosomes sont reflétées dans l’acquisition de nouvelles fonctionnalités dans la cellule transformée.

mots-clés: transformation cellulaire, lysosomes, morphométrie.

Résumé

Contexte: La transformation cellulaire est le mécanisme de résultat d’une action puissante générée par la transformation de l’oncogène sur une cellule normale, qui, avec l’expression de la mécoprotéine à la suspension entraîne des changements dressés de morphologie ainsi que des volumes de composants cellulaires, générant une cellule avec une fonction différente. Objectif: Spécifier les modifications qui caractérisent le mécanisme de transformation dans les cellules épithéliales mammaires transfectées avec le RAS oncogene les comparant avec le type de cellule normal RAS. Méthode: La microscopie électronique de transmission utilisant des techniques morphométriques a été appliquée à ces types de cellules, soulignant la variation des lysosomes, essayant de clarifier le rôle de sites dans chaque métabolisme de type cellulaire. Résultats: Tous les paramètres lysosomaux examinés dans des différences de signalisation de type cellulaire transformées concernant les cellules normales. Conclusion: Les changements permessirs dans les lysosomes reflétés dans l’acquisition de nouvelles exigences énergétiques et de métabolisme dans la cellule transformée.

mots clés: transformation cellulaire, lysosomes, morphométrie.

Introduction

>

Les cellules HC11 constituent une ligne normale de l’épithélium mammaire dérivée de la lignée commune 1D, obtenue à partir de la glande mammaire des rats Balb / C dans une demi-grossesse, qui sont disposées en contact étroit et formant un épithélium cubique en mono-couche. Ces cellules conservent des caractéristiques de la différenciation normale de la glande et synthétisent 6 caséine, la principale protéine de lait (1).

Ces cellules mamudiennes normales et dans la phase de prolifération reçoivent la stimulation du facteur de croissance épidermique (EGF), un agent mythogène qui rejoint un récepteur de la tyrosine kinase au niveau de la membrane plasmatique phosphoryling les protéines cytoplasmiques de phosphorisation, une étape fondamentale dans le développement de la réponse mitogène (2).

Dans la mesure où l’introduction est faite dans Les cellules HC11 de l’expression de la protéine oncogène HA-RAS Celles-ci supposent que différentes propriétés donnent lieu à un type de cellule modifié et avec des caractéristiques néoplasiques (3,4).

au cours de la transformation entre les cellules que proliférer (HC11 GM) et ceux qui souffrent des variations des composants produits de l’action oncogène (HC11 RAS), la fonctionnalité lysosomale acquiert un rôle fondamental étant responsable o d’activités digestives dérivées des mécanismes de phage et de pinétocytose en tant que produit du processus autophagien (5). Dans ce contexte, considérant que les lysosomes sont responsables du processus de dégradation de l’environnement cellulaire et de la cytoplasme (6,7), il semblait important de déterminer du point de vue qualitatif et morphologique, les variations que cet engin présente pendant la Mécanisme de transformation cellulaire.

matériau et méthode

Microscopie électronique de transmission. Le granulier contenant des cellules HC11 GM et HC11 RAS a été ajouté à 2% de solution de glutaraldéhyde, dans une tampon de phosphate de 0,15 m, pH 7,2 et maintenue à la température ambiante pendant 2 heures. Par la suite, il a été soumis à une solution de 6 g de Nation et 73 g de saccharose, dissous dans 1 litre d’eau distillée. La post-fixation a été réalisée dans une solution de tétroxyde d’osmium à 1% dissoute dans la solution de lavage décrite ci-dessus pendant une heure à 40 ans C et 0,5% d’acétate d’Ura-Nilo, pendant 18 heures.

Après le lavage, le matériau a été déshydraté dans des concentrations croissantes d’acétone (30 à 100%) et incluses dans Araldita 6005. Des coupes ultra-minces d’environ 70 nm d’épaisseur, celles traitées avec de l’acétate d’ura ont été obtenues – Nil 2% pour 40 minutes et 0,5% de citrate de plomb, pendant 10 minutes. Les échantillons ont été étudiés et photographiés dans un microscope électronique de Phillips EM 400 EM.

Méthode stéréologique. Des blocs pour la microscopie électronique, des coupes ultra-minces ont été obtenues dans lesquelles chacun des taux cellulaires était microgé, avec une augmentation de 10 500 X. Pour l’évaluation des fractions volumétriques lysosomales, un réticulum à point était superposé, dans les micrographies électroniques et le différentiel CON-TEO a été procédé par les profils desdits organites, calculant la fraction volumétrique qu’elle occupe, par l’équation suivante:

Pour le calcul de la zone lysosomale, le logiciel Sigma Scan Pro 5.0 a été utilisé. Afin de déterminer des différences statistiquement significatives, les données morphométriques ont été soumises au test Wilcoxon pour des échantillons non paramétriques.

résultats

analyse quantitative. Les fractions volumétriques correspondant aux lysosomes quantifiés dans des types de cellules prolifératives et transformées sont illustrés à la figure 1, en évitant qu’il existe une différence claire de la vitesse de mécanismes endocytoscitiques et autophagiques de chaque cellule. Encore plus, étudié, quantifié et soumis tous les résultats obtenus au test statistique de Wilcoxon pour des échantillons non paramétriques, avec une confiance de 95% et une erreur de 5%, compte tenu d’un p = 0,42 et de 0,43 et envisageant que ce test établit des différences avec un valeur de z = à 2 032 et 2,023 pour les longueurs et les zones que les lysosomes (choisies par hasard) et dans le nombre d’organites évaluées dans les cellules HC11 GM et HC11 RAS, indiquent qu’il existe des différences marquées, une situation clairement mise en évidence dans les tables I, II et III, respectivement.

analyse morphologique. Les lysosomes rares appartenant à la cellule proliférante se caractérisent par une répartition aléatoire dans tout son cytoplasme (figure 2), présentant une structure essentiellement sphérique et une petite structure en mettant en évidence la présence de sa structure membraneuse entourant une lumière qui peut apparaître à la fois homogène et translucide comme des électrodensions (flèches ). D’autre part, comme le montre la figure 3, les multiples lysosomes trouvés dans la cellule transformée sont caractérisées par une taille de grande taille, agglomération dans toute la surface cytoplasmique, en évitant divers formes circulaires et ovoïdes et dont la caractéristique principale doit être présentée comme des corps multifulticulaires dans lesquels Intérieur Il y a des vestiges de produit de digestion cellulaire (flèches).

>

discussion

Les données morphométriques présentées ici décrivent que les cellules dans le processus prolifératif et hautement indifférencié manquent d’organites, une situation qui est cohérente avec ce qui est décrit en 1975 par Junqueira et Salles (8), dans le sens qui a montré que les cellules indifférenciées ne possèdent pratiquement pas d’organites, y compris des lysosomes, dont la traduction fonctionnelle dans ce cas est représentée par des mécanismes rares d’endoci-tosis et d’autophagie.

dans cette même direction Trump et COIS (9), ils ont déjà décrit que l’autophagie est un mécanisme caractéristique des cellules qui suivent le cours normal des processus de différenciation, abandonnant les phases indifférenciées de la simple prolifération et la croissance cellulaire.

d’autre part, transfection De ces cellules mammaires à travers le RAS oncogene, elle se traduit par la cessation immédiate de la synthèse laitière due au bloc de F Acteur de transcription du gène de la caséine et avec l’acquisition résultant d’un phénotype néoplastique (10). Ces données sont importantes, car en 1987, FAWCET (11) décrivait une augmentation du nombre de lysosomes dans le nombre de lysosomes que la durée de lactation, à compter de la période d’involution de la glande mammaire, de preuves, comme dans nos résultats. , un grand nombre de lysosomes secondaires sous la forme de corps cultivés multiples contenant des portions d’organites comme un réticulum endoplasmique granulaire, des mitochondries ou des granulés de sécrétion à l’intérieur. Ce processus d’autophagie aurait un objectif un éventuel rénovation de ces cellules transformées.

Dans le même sens, nos résultats montrent clairement que les lysosomes subissent diverses modifications avec la décoration du mécanisme de transformation, et il est évident une augmentation drastique du volume, du nombre et de la longueur, et dans les zones de Ces organites. Ces données coïncident avec ce qui est rapporté par Trump et Ciis (9), qui posent que lorsque des cellules normales sont soumises à des blessures sub-lea-les-les-Les (telles que la transfection avec RAS), des procédés autopastiques de multiples lysosomes sont générés.

visualisation des variations éprouvées par les lysosomes avec l’évolution du mécanisme de transformation, il est évident qu’il correspond au reflet des altérations du métabolisme des cellules et qu’il peut donc être conclu que l’évaluation de cet organélisme , Quantifié dans des cellules transformées, ils expriment des augmentations remarquables et donc, ces augmentations radicales de tous les paramètres quantifiés, déterminent un marqueur solide du processus de transformation cellulaire dans cet épithélium mammaire (12).

bibliographie

1. Mars BM, Jeschke M, Graus-Porta D, Taverna D, Hofer P, Gronlet B, et al. Le facteur de différenciation de NEU, la régulation de la régulation module la croissance et la différenciation des cellules épithéliales mammaires HC11. Mol Endocrinol 1995; 9: 14-23.

2. Normanno N, CIARDELLO F. PEPTIDES CONNEXES EGF dans la pathophysiologie de la glande mammaire. J Néoplasie Biol Biol J Mammary Glandes 1997; 2: 143-51.

3. Egan S, Wright J, Greenberg A. Déterminants moléculaires de la transformation métastatique. Persécurité de la santé de l’environnement 1991; 93: 91-5.

4. Hynes N, Taverna D, Citriona M, Stiefel U, Taverna D, Ball R, et al. Les V-RAF et HA-Rasoncogenes inhibent la transcription du promoteur du gène bêta-caséine par la suppression d’un facteur de transcription spécifique à la glande mammaire. Dans: Li J. Carcinogenèse hormonale. Berlin, Springer Verlag, 1993, 164-71.

5. Darnell J, H Sodish H, Baltimore D, Biologie des cellules moléculaires. Livres scientifiques éditoriaux américains, New York, 1990; 559-669.

6. Junqueira L, Carneiro J. Biologie cellulaire et moléculaire. Éditorial McGraw-Hill interaméricain, Sao Paulo, 1997; 99-101.

7. H Sodish H, Berk A, Zipursky S, Matsudaira P, Baltimore D, Darnell J. Biologie cellulaire et moléculaire. Éditorial médical panaméricain, Madrid Espagne, 2003, 622-31.

8. Junqueira L, Salles L. Ultrastructure et Fungao cellulaire. Éditorial Guanabara-Koogan. Rio de Janeiro, 1975, 20-102.

9. Trump B, Berezesky I, Collan et Kahng M, Mergner W. Rezcent Studes sur la pathophysiologie de la blessure à la cellule ische-micro. Beitre Pathol 1976; 158: 363-88.

10. HIS B, HYNES N, Gronboard B. HA-RAS et V-RAF oncogenes, mais non INT-2 et C-MYC, interfèrent avec l’activation de l’hormone lacogène dépendant du facteur de transcription spécifique de la glande mammaire. La croissance cellulaire diffère 1993; 4: 9-15.

11. Fawcett D. Traité Histologie. Interameri-Cana-McGraw-Hill, 1987, 240-36.

12. Celia N, Cornejo R, Montes G, Hynes N, Charmas R. Le lampe de protéine membranaire associée à la lysosomale-1 est un nouveau marqueur de différenciation pour les cellules épithéliales mammaires de la souris HC11. Différenciation 1996; 61: 113-20.

Laisser un commentaire

Votre adresse e-mail ne sera pas publiée. Les champs obligatoires sont indiqués avec *