Análise morfométrica de lisosomas: marcadores de transformación celular do epitelio mamario

Rev Chil Obstet Gynecol 2009; 74 (2): 83-87

Obras orixinais

Análise morfométrica de lisosomas: marcadores de transformación celular do epitelio mamario

Ricardo Cornejo U. A

Departamento de Ciencias Básicas, Facultade de Medicina, Universidade da Frontera, Temuco.
un biólogo celular, doutorado.

Resumo

Fondos: a transformación celular é o mecanismo resultante da poderosa acción xerada por xenes transformadores nunha célula normal, que coa consecuente expresión De oncoproteínas determinan cambios drásticos en morfoloxía e volumes de compoñentes celulares, xerando unha cela con diferentes funcionalidades. Obxectivo: especificar as modificacións que caracterizan o mecanismo transferible nas células do epitelio mamarias transfactadas co RAS oncoge (HC1RA) en comparación co seu tipo de célula normal (HC11GM). Método: A microscopía de transmisión electrónica foi estudada aplicando técnicas morfométricas a estes tipos de células con énfase en lisosomas, variacións de escritura do organismo responsable da dixestión celular. Resultados: Todos os parámetros lisosomales avaliados no tipo de célula transformada presentan diferenzas significativas con respecto á célula normal. Conclusión: as modificacións drásticas que experimentadas por lisosomas reflíctense na adquisición de novas funcionalidades na célula transformada.

Palabras clave: transformación celular, lisosomas, morfometría.

Resumo

Fondo: a transformación celular é o mecanismo de resultado da acción poderosa xerada pola transformación de oncogene a través dunha célula normal, que coa expresión de oncoproteína subsechente conduce a cambios drésis na morfoloxía, así como en volumes de compoñentes celulares, xerando unha cela cunha función diferente Obxectivo: especificar as modificacións que caracterizan o mecanismo transformador nas células epiteliales mamarias transfectadas co Ras Oncogene comparándoas co tipo de célula normal RAS. Método: A microscopía electrónica de transmisión utilizando técnicas morfométricas aplicouse a este tipo de células, destacando a variación de lisosomas, intentando aclarar o papel dos sitios en cada metabolismo tipo celular. Resultados: todos os parámetros lisosomales examinados en tipo de células transformadas presentan diferenzas de sinatura sobre as células normais. Conclusión: Os cambios diegantes en lisosomas reflectidos na adquisición de novos requisitos de enerxía e metabolismo na célula transformada.

Palabras clave: transformación celular, lisosomas, morfometría.

Introdución

As células HC11 constitúen unha liña de epitelio mamaria normal derivada do linaje de 1D de Almunher, obtido a partir da glándula Mammary de Rats de Balb / C á metade do embarazo, que están dispostas en estreito contacto e formando un epitelio cúbico en mono-capa. Estas células conservan características da diferenciación normal da glándula e sintetizan 6 caseína, a principal proteína do leite (1).

Estas células mamariais normais e na fase de proliferación reciben a estimulación do factor de crecemento epidérmico (EGF), un axente mitóxeno que se une a un receptor de tirosina quinasa a nivel da membrana plasmática fosforena proteínas citoplasmáticas, unha etapa fundamental no desenvolvemento da resposta mitogénica (2).

Na medida en que se realiza a introdución As células HC11 da expresión da proteína oncogénica HA-RAS que asumen diferentes propiedades que dan lugar a un tipo de célula modificado e con características neoplásicas (3,4).

Ao longo da transformación entre as células que só proliferar (HC11 GM) e aqueles que sofren das variacións de compoñentes produto da acción oncogénica (HC11 RAS), a funcionalidade lisosomal adquire un papel fundamental que é responsable o de actividades dixestivas derivadas dos mecanismos de fagos e pinocitosis como produto do proceso autofáxico (5). Neste contexto, tendo en conta que os lisosomas son responsables do proceso degradativo do ambiente celular e do citoplasma (6,7), parecía importante determinar a partir do punto de vista cualitativo e morfolóxico, as variacións que presenta este organismo durante o Mecanismo de transformación celular.

Material e método

Microscopía de transmisión electrónica. O Pellet que contén células HC11 GM e HC11 RAS engadiuse 2% de solución Glutaraldehído, en buffer de fosfato de 0,15 m, pH 7.2 e mantido a temperatura ambiente durante 2 horas. Posteriormente, foi sometido a unha solución de lavado de 6 g de nación e 73 g de sacarosa, disolta en 1 litro de auga destilada. A posición post-fixación realizouse nunha solución de tetróxido de OSMium disolveuse na solución de lavado descrita anteriormente durante unha hora a 40 anos e 0,5% de acetato URA-NILO, durante 18 horas.

Despois de lavar o material foi deshidratado en crecentes concentracións de acetona (30 a 100%) e incluídas en ARALDITA 6005. Recortes ultra-finos de aproximadamente 70 nm de espesor, obtivéronse os que foron tratados con acetato de URA – Nilo 2% durante 40 minutos e 0,5% de citrato de chumbo, por 10 minutos. As mostras foron estudadas e fotografadas nun microscopio de electróns de Phillips EM 400.

Método estereolóxico. Dende os bloques de microscopía electrónica, obtivéronse cortes ultra-finos, en que cada unha das taxas celulares foi micrografada, cun aumento de 10.500 x. Para a avaliación das fraccións volumétricas lisosomales, un punto de retículo foi superposto, nas micrografías electrónicas E o diferencial Con-Teo foi procedente polos perfís de devanditos organelos, calculando a fracción volumétrica que ocupa, pola seguinte ecuación:

Para o cálculo da área lisosomal, usouse o software Sigma Scan Pro 5.0. Para determinar diferenzas estatisticamente significativas, os datos morfométricos foron sometidos á proba de Wilcoxon para mostras non paramétricas.

Resultados

Análise cuantitativa. As fraccións volumétricas correspondentes ás lysosomas cuantificadas en tipos de células proliferativas e transformadas móstranse na Figura 1, que eviden que hai unha clara diferenza na taxa de mecanismos endocitoscíticos e autófagicos en cada cela. Aínda máis, estudado, cuantificado e presentado todos os resultados obtidos na proba estatística de Wilcoxon para mostras non paramétricas, con 95% de confianza e un erro do 5%, considerando un p = 0,42 e 0,43 e considerando que esta proba establece diferenzas con A valor de z = a 2,032 e 2.023 tanto para as lonxitudes como as áreas que os lisosomas (escollidos por casualidade) e no número de organelos avaliados nas células HC11 GM e HC11 RAS, indican que hai diferenzas marcadas, unha situación claramente evidenciada en táboas I, II e III, respectivamente.


Análise morfolóxica. Os escasos lisosomas pertencentes á célula proliferante caracterízanse por aleatoriamente distribuídos ao longo do seu citoplasma (Figura 2), presentando unha estrutura basicamente esférica e pequena destacando a presenza da súa estrutura membranosa que rodea a un lumen que pode aparecer tanto homoxéneo como translúcido como electrodos (frechas ). Doutra banda, como se mostra na Figura 3, os múltiples lisosomas que se atopan na célula transformada caracterízanse por gran tamaño, organizando ao longo da superficie citoplasmática, que evita varias formas circulares e ovoides e cuxa característica principal debe ser presentada como corpos multivesticulares en cuxa Interior Hai restos de produtos de dixestión celular (frechas).

Discusión

Os datos morfométricos presentados aquí describen que as células en procesos proliferativos e altamente indiferenciados non teñen organelos, unha situación que é consistente co que se describe en 1975 por Junqueira e Salles (8), en O sentido que demostrou que as células indiferenciadas prácticamente non teñen organelos, incluídos os lisosomas, cuxa tradución funcional neste caso está representada por mecanismos escasos de endoci-tosis e autofagia.

Nesta mesma dirección Trump e Cois (9), xa describiron que a autofagia é un mecanismo característico das células que seguen o curso normal dos procesos de diferenciación, abandonando as fases indiferenciadas da mera proliferación e crecemento celular.

Por outra banda, a transfección Das células mamaria a través do Ras Oncogene, tradúcese no cesamento inmediato da síntese de produtos lácteos debido ao bloque de f Actor de transcrición do xene de caso 6 e coa consecuente adquisición dun fenotipo neoplástico (10). Este dato é importante, xa que en 1987 Fawcet (11) describiu un aumento no número de lisosomas no número de lisosomas como o prazo de lactación, é dicir, comezando o período de involución da glándula mamaria, evidencia, como nos nosos resultados , unha gran cantidade de lisosomas secundarios en forma de órganos de culular multivel que conteñen porcións de orgánulos como un retículo endoplasmático granular, mitocondria ou gránulos de secreción dentro. Este proceso autofagico tería un obxectivo dunha remodelación eventual destas células transformadas.

Neste mesmo sentido, os nosos resultados mostran claramente que os lisosomas sofren varias modificacións coa decoración do mecanismo de transformación e é evidente un aumento drástico tanto no volume, número e lonxitude e nas áreas de Estes orgánulos. Estes datos coinciden co que se informa por Trump e Cois (9), que representan que cando as células normais están suxeitas a lesións sub-lea-les (como a transfección con RAS), xérranse múltiples activos de activos de activos de lysosomas.

Visualizando as variacións experimentadas polos lisosomas coa evolución do mecanismo de transformación, é obvio que corresponde ao reflexo das alteracións no metabolismo das células e, polo tanto, pódese concluír que a avaliación deste organelo , Cuantificado en células transformadas, expresan aumentos notables e, polo tanto, estes aumentos drásticos en todos os parámetros cuantificados, determinan un marcador sólido do proceso de transformación celular neste epitelio mamario (12).

Bibliografía

1. Marte BM, Jeschke M, Graus-Porta D, Taverna D, Hofer P, Gronlet B, et al. O factor de diferenciación de Neu He-Regulin modula o crecemento e a diferenciación das células epiteliales mamarias HC11. Mol Endocrinol 1995; 9: 14-23.

2. Normanno N, Ciardello F. EGF péptidos relacionados na fisiopatería da glándula mamaria. J Mammary Gland Biol Neoplasia 1997; 2: 143-51.

3. Egan S, Wright J, Greenberg A. Determinantes moleculares da transformación metastática. Persecurity Saúde Environ 1991; 93: 91-5.

4. Hynes N, Taverna D, Citriona M, Stiefel U, Taverna D, Ball R, et al. Os V-RAF e HA-RASONCOGENES inhiben a transcrición do promotor do xene beta-caseína pola supresión dun factor de transcrición específica de glándula mamaria. En: Li J. Carcinogénesis hormonal. Berlín, Springer Verlag, 1993, 164-71.

5. Darnell J, Lodish H, Baltimore D, Bioloxía Molecular Celular. Editorial Científico American Books, Nova York, 1990; 559-669.

6. Junqueira L, Carneiro J. Bioloxía celular e molecular. Editorial McGraw-Hill Interamericano, Sao Paulo, 1997; 99-101.

7. Lodish H, Berk A, Zipursky S, Matsudaira P, Baltimore D, Darnell J. Bioloxía celular e molecular. PAN American Medical Editorial, Madrid España, 2003; 622-31.

8. Junqueira L, Salles L. Ultracture e Fungao celular. Editorial Guanabara-Koogan. Río de Xaneiro, 1975, 20-102.

9. Trump B, Berezesky I, Collan e, Kahng M, Mergner W. Recuperación Estudos sobre a fisiopatoloxía da lesión celular ische-mic. Beitre Pathol 1976; 158: 363-88.

10. Happ B, Hynes N, GronBoard B. Ha-Ras e V-RAF Oncogenes, pero non INT-2 e C-MYC, interfiren coa activación da hormona lactogénica do factor de transcrición específica da glándula mamaria. O crecemento celular difire en 1993; 4: 9-15.

11. Fawcett D. Tratado de histoloxía. Interameri-Cana-McGraw-Hill, 1987, 240-36.

12. Celia N, Cornejo R, Montes G, Hynes N, Chammas R. A lisosomal de proteína asociada a membrana Lámpada-1 é unha novela diferenciación para as células epiteliales mamarias do rato HC11. DIFERENCIACIÓN 1996; 61: 113-20.

Deixa unha resposta

O teu enderezo electrónico non se publicará Os campos obrigatorios están marcados con *