Analisi morfometrica dei lisosomi: marcatori di trasformazione cellulare dell’epitelio mammario

Rev Chil Ostet Gynecol 2009; 74 (2): 83-87

Opere originali

Analisi morfometrica dei lisosomi: marcatori di trasformazione cellulare dell’epitelio mammario

Ricardo Cornejo U. A

Dipartimento di Scienze di base, Facoltà di Medicina, Università della Frontera, Temuco.
Un biologo cellulare, dottorato.

Sommario

Sfondi

Sfondi: La trasformazione delle cellule è il meccanismo derivante dalla potente azione generata da geni trasformatori su una normale cella, che con la conseguente espressione Di oncoproteine determinano drastidi cambiamenti sia in morfologia che in volumi di componenti cellulari, generando una cella con funzionalità diverse. Obiettivo: specificare le modifiche che caratterizzano il meccanismo trasferibile nelle celle di epitelio dei mammari trasmessi con il RAS OnCoge (HC1RA) rispetto al normale tipo di cella (HC11GM). Metodo: la microscopia di trasmissione elettronica è stata studiata applicando tecniche morfometriche a questi tipi di cellule con enfasi sui lisosomi, come la digitazione delle variazioni dell’organnel responsabile della digestione cellulare. Risultati: tutti i parametri lisosomali valutati nel tipo di cellulare trasformato presentano differenze significative rispetto alla cellula normale. Conclusione: le drastiche modifiche sperimentate dai lisosomi si riflettono nell’acquisizione di nuove funzionalità nella cella trasformata.

Parole chiave: trasformazione cellulare, lisosomi, morfometria.

Riepilogo

P> Sfondo: la trasformazione cellulare è il meccanismo dei risultati di potente azione generata trasformando l’oncogene su una normale cella, che con l’espressione di oncoproteina più avanzata porta a cambiamenti di morfologia nonché nei volumi di componenti cellulari, generando una cella con una funzione diversa Obiettivo: specificare le modifiche che caratterizzano il meccanismo di trasformazione nelle celle epiteliali mammarie trasfettate con il RAS oncogene confrontandoli con il tipo di cella normale RAS. Metodo: la microscopia elettronica della trasmissione che utilizza tecniche morfometriche è stata applicata a questi tipi di cellule, sottolineando la variazione delle lisosomi, cercando di chiarire il ruolo dei siti in ciascun metabolismo del tipo di cella. Risultati: Tutti i parametri lisosomiali esaminati in tipo cellulare trasformato presentano differenze decisamente relative alle cellule normali. Conclusione: Le drestic Cambiamenti nei lisosomi riflette nella acquisizione dei requisiti nuova energia e del metabolismo nella cellula trasformata

Parole chiave:.. La trasformazione cellulare, lisosomi, Morfometria

Introduzione

Le cellule HC11 costituiscono una normale linea di epithelium mammaria derivate dal lignaggio del Commmon 1D, ottenuto dalla ghiandola mammaria dei ratti BALB / C a metà gravidanza, che sono disposti in stretto contatto e formando un epitelio cubico in mono-strato. Queste cellule conservano le caratteristiche della normale differenziazione della ghiandola e sintetizza 6 caseina, la proteina principale del latte (1).

Queste normali cellule mamarie e in fase di proliferazione ricevono la stimolazione del fattore di crescita epidermico (EGF), Un agente mitogeneo che si unisce a un recettore della tirosina chinasi al livello delle proteine cytoplasmatiche della membrana plasmatica, una fase fondamentale nello sviluppo della risposta mitogena (2).

nella misura in cui l’introduzione è effettuata in Le cellule HC11 di espressione della proteina oncogenica ha-ras questi assumono diverse proprietà dando origine a un tipo di cella modificata e con caratteristiche neoplastiche (3,4).

nel corso della trasformazione tra le cellule solo proliferare (HC11 GM) e coloro che soffrono delle variazioni del prodotto dei componenti dell’azione oncogenica (HC11 RAS), la funzionalità lisosomiale acquisisce un ruolo fondamentale O di attività digestive derivate dai meccanismi di Phage e Pinocitosi come prodotto del processo autofageo (5). In questo contesto, considerando che i lisosomi sono responsabili del processo degradativo dell’ambiente cellulare e dello stesso del citoplasma (6,7), sembrava importante determinare dal punto di vista qualitativo e morfologico, le variazioni che questo organnel presenta durante il Meccanismo di trasformazione cellulare.

Materiale e metodo

Microscopia di trasmissione elettronica. La pellet contenente le cellule HC11 GM e HC11 RAS è stata aggiunta 2% Glutaraldehyde Solution, in un buffer fosfato di 0,15 m, pH 7.2 e mantenuto a temperatura ambiente per 2 ore. Successivamente, è stato sottoposto a una soluzione di lavaggio di 6 g di nazione e 73 g di saccarosio, disciolto in 1 litro di acqua distillata. La post-fissazione è stata eseguita in soluzione di tetroxide osmium dell’1% sciolta nella soluzione di lavaggio sopra descritta per un’ora a 40 ° C e 0,5% di ura-Nilo acetato, per 18 ore.

Dopo aver lavato il materiale è stato disidratato nell’aumentare di concentrazioni di acetone (da 30 a 100%) e incluso in Araldita 6005. Tagli ultrasottili di circa 70 Nm di spessore, sono stati ottenuti quelli trattati con l’acetato di ura – Nilo 2% per 40 minuti e 0,5% di citrato di piombo, per 10 minuti. I campioni sono stati studiati e fotografati in un microscopio elettronico Phillips EM 400.

Metodo stereologico. Dai blocchi per microscopia elettronica, sono stati ottenuti tagli ultrasottili, in cui ciascuno dei tassi cellulari erano micrografati, con un aumento di 10.500 x. Per la valutazione delle frazioni volumetriche lisosomiali, un punto reticolo del punto è stato sovrapposto, nelle micrografie elettroniche E il differenziale con-teo è stato proceduto dai profili di detti organelli, calcolando la frazione volumetrica che occupa, dalla seguente equazione:

Per il calcolo dell’area lisosomiale, è stato utilizzato il software Sigma Scan Pro 5.0. Al fine di determinare differenze statisticamente significative, i dati morfometrici sono stati sottoposti al test Wilcoxon per campioni non parametrici.

Risultati

Analisi quantitativa. Le frazioni volumetriche corrispondenti ai lisosomi quantificati nei tipi di cellule proliferativi e trasformate sono mostrate nella figura 1, che esiste che vi è una chiara differenza nella velocità di meccanismi endocitomitici e autofagici in ciascuna cella. Ancora più, studiato, quantificato e ha presentato tutti i risultati ottenuti alla prova statistica di Wilcoxon per campioni non parametrici, con la sicurezza del 95% e un errore del 5%, considerando un P = 0,42 e 0,43 e considerando che questo test stabilisce differenze con a Valore di Z = a 2.032 e 2.023 sia per le lunghezze che per le aree che i lisosomi (scelta per caso) e nel numero di organelli valutati nelle cellule HC11 GM e HC11 RAS, indicano che ci sono differenze contrassegnate, una situazione chiaramente evidenziata nelle tabelle I, II e III, rispettivamente.

Analisi morfologica. Le scarse lisosomi appartenenti alla cellula proliferante sono caratterizzate da una distribuzione casualmente in tutto il citoplasma (figura 2), presentando una struttura fondamentalmente sferica e piccola evidenziando la presenza della sua struttura membranosa che circonda un lumen che può apparire sia omogeneo che traslucido come elettrodendens (frecce ). D’altra parte, come mostrato nella figura 3 le più lisosomi trovate nella cella trasformata sono caratterizzate da grandi dimensioni, che si organizzano in tutta la superficie citoplasmatica, esaminando varie forme sia circolari che ovoide e la cui caratteristica principale deve essere presentata come corpi multiva Interni Ci sono resti del prodotto di digestione cellulare (frecce).

Discussione

I dati morfometrici presentati qui descrivono che le cellule in processo proliferativo e altamente indifferenziato non hanno organelli, una situazione che è coerente con ciò che è descritto nel 1975 da Junqueira e Salles (8), in Il senso che ha dimostrato che le cellule indifferenziate non hanno praticamente organelli, comprese lisosomi, la cui traduzione funzionale in questo caso è rappresentata dai meccanismi scarsi di endoci-tosi e dell’autofagia.

in questa stessa direzione Trump e COIS (9), hanno già descritto che l’autofagia è un meccanismo caratteristico delle cellule che seguono il normale corso dei processi di differenziazione, abbandonando le fasi indifferenziate della semplice proliferazione e della crescita cellulare.

D’altra parte, Transfection Di queste cellule mammarie attraverso il Ras oncogene, si traduce nella cessazione immediata della sintesi del latte a causa del blocco di f Attore di trascrizione del gene 6 casein e con la conseguente acquisizione di un fenotipo neoplastico (10). Questi dati sono importanti, poiché nel 1987 FAWCET (11) ha descritto un aumento del numero di lisosomi nel numero di lisosomi come termine di allattamento, cioè, iniziando il periodo di involuzione della ghiandola mammaria, prove, come nei nostri risultati , un gran numero di lisosomi secondari sotto forma di corpi multilve-cululari contenenti porzioni di organelli come un reticolo endoplasmatico granulare, mitocondri o granuli di secrezione all’interno. Questo processo di autofagia avrebbe un obiettivo un eventuale rimodellamento di queste cellule trasformate.

In questo stesso senso, i nostri risultati mostrano chiaramente che i lisosomi subiscono varie modifiche con la decorazione del meccanismo di trasformazione, ed è evidente un drastico aumento sia del volume, del numero e della lunghezza e nelle aree di Questi organelli. Questi dati sono coincidenti con ciò che è stato riportato da Trump e COIS (9), che posa che quando le normali cellule sono sottoposte a infortuni a Lea-lea-les (come il trasfezione con RAS), vengono generate multiple I processi autocastrici sono generati.

Visualizzazione delle variazioni sperimentate dai lisosomi con l’evoluzione del meccanismo di trasformazione, è ovvio che corrisponde al riflesso delle alterazioni nel metabolismo delle cellule e pertanto, si può concludere che la valutazione di questo organello , Quantificati in celle trasformate, esprimono notevoli aumenti e quindi, questi drastici aumenta in tutti i parametri quantificati, determinano un marker solido del processo di trasformazione delle cellule in questo epitelio mammario (12).

Bibliografia

1. Mars Bm, Jeschke M, Graus-Porta D, Taverna D, Hofer P, Gronlet B, et al. Il fattore di differenziazione Neu-Regulin modula la crescita e la differenziazione delle cellule epiteliali mammarie HC11. Mol endocrinolo 1995; 9: 14-23.

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8. Junqueira L, Salles L. Ultrastruttura e fungao cellulare. Editoriale Guanabara-Koogan. Rio de Janeiro, 1975, 20-102.

9. Trump B, Berezsky I, Collan e, Kahng M, Mergner W. Studi rientrali sulla fisiopatologia della ferita delle cellule ische-microfono. Beitre Pathol 1976; 158: 363-88.

10. APPRESTO B, HYNES N, Gronboard B. HA-RAS e V-RAF Oncogenes, ma non INT-2 e C-MYC, interferiscono con l’attivazione di ormone lattogenico dipendente dal fattore di trascrizione specifico della ghiandola mammaria. La crescita delle cellule differisce del 1993; 4: 9-15.

11. Fawcett D. Trattato di istologia. Interameri-Cana-McGraw-Hill, 1987, 240-36.

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