Análise morfométrica dos lisossomos: Marcadores de transformação celular do epitélio mamário

REV chil obstetos ginecol 2009; 74 (2): 83-87

Original trabalhos

Análise morfométrica dos lisossomos: Marcadores de transformação celular do epitélio mamário

Ricardo Cornejo U. A

Departamento de Ciências Básicas, Faculdade de Medicina, Universidade do Frontera, Temuco.
Um biólogo celular, PhD.

fundos

fundos: A transformação celular é o mecanismo resultante da poderosa ação gerada por genes transformantes em uma célula normal, que com a consequente expressão de oncoproteínas determinam mudanças drásticas na morfologia e volumes de componentes celulares, gerando uma célula com diferentes funcionalidades. OBJETIVO: Para especificar as modificações que caracterizam o mecanismo transferível nas células de epitélio mamário transfectadas com o OneCoge RAS (HC1RA) em comparação com seu tipo de célula normal (HC11GM). Método: A microscopia de transmissão eletrônica foi estudada aplicando técnicas morfométricas a esses tipos de células com ênfase em lisossomos, como digitar variações do organnel responsável pela digestão celular. Resultados: Todos os parâmetros lisossomais avaliados no tipo de célula transformado apresenta diferenças significativas em relação à célula normal. CONCLUSÃO: As modificações drásticas vividas por lisossomas são refletidas na aquisição de novas funcionalidades na célula transformada.

Palavras-chave: Transformação celular, lisossomos, morfometria.

resumo

Background: A transformação celular é o mecanismo de resultado da ação poderosa gerada por transformação de oncogeno sobre uma célula normal, que com a expressão de oncoproteína subsechente leva a mudanças drest na morfologia, bem como nos volumes de componentes de células, gerando uma célula com uma função diferente OBJETIVO: Para especificar as modificações que caracterizam o mecanismo de transformação em células epiteliais mamárias transfectadas com o oncogene RAS, comparando-os com o tipo de célula normal da RS. Método: Microscopia eletrônica de transmissão usando técnicas morfométricas foi aplicada a este tipo de célula, enfatizando a variação dos lisossomos, tentando esclarecer papel de sites no metabolismo do tipo celular. RESULTADOS: Todos os parâmetros lisossomais examinados em tipo de célula transformada diferenças de significantes em relação às células normais. CONCLUSÃO: As alterações inseridas nos lisossomos refletiram na aquisição de novos requisitos de energia e metabolismo na célula transformada.

palavras-chave: transformação celular, lisossomos, morfometria.

introdução

introdução

introdução

As células HC11 constituem uma linha de epitélio mamário normal derivada da linhagem de 1D commina, obtida a partir de ratos BALB / C glândula mamária na metade da gravidez, que estão dispostas em contato próximo e formando um epitélio cúbico na mono-camada. Essas células retêm características da diferenciação normal da glândula e sintetizam 6 caseína, a principal proteína do leite (1).

Essas células mamárias normais e na fase de proliferação recebem a estimulação do fator de crescimento epidérmico (EGF), Um agente mitogêneo que une um receptor de tirosina quinase no nível das proteínas citoplasmicas de fosforimentação de membrana plasmática, uma fase fundamental no desenvolvimento da resposta mitogênica (2).

Na medida em que a introdução é feita em As células HC11 da expressão das proteínas oncogênicas HA-RAS estes assumem diferentes propriedades que dão origem a um tipo de célula modificado e com características neoplásicas (3,4).

No curso da transformação entre as células que apenas Proliferar (HC11 GM) e aqueles que sofrem com as variações de produtos de componentes de ação oncogênico (HC11 RAS), a funcionalidade lisossômica adquire um papel fundamental que é responsável o de atividades digestivas derivadas de mecanismos de fago e pinocitose como um produto do processo autofágico (5). Neste contexto, considerando que os lisossomos são responsáveis pelo processo degradativo de ambiente celular e próprios do citoplasma (6,7), parecia importante determinar o ponto de vista qualitativo e morfológico, as variações que este organnel apresenta durante o Mecanismo de transformação celular.

Método e método

microscopia de transmissão eletrônica. O pellet contendo células HC11 GM e HC11 RAS foi adicionado 2% de solução de glutaraldeído, em tampão de fosfato de 0,15 m, pH 7,2 e mantida à temperatura ambiente durante 2 horas. Posteriormente, ele foi submetido a uma lavagem de soluções de 6 g de nação e 73 g de sacarose, dissolvida em 1 litro de água destilada. A fixação pós-fixação foi realizada em solução de tetroxida de ósmio a 1% dissolvida na solução de lavagem descrita acima por uma hora a 40 e 0,5% de acetato de URA-Nilo, durante 18 horas.

Após lavar o material foi desidratado em concentrações crescentes de acetona (30 a 100%) e incluídas no araldita 6005. Cortes ultra-finos de aproximadamente 70 nm de espessura, aqueles que foram tratados com acetato de URA foram obtidos – Nilo 2% por 40 minutos e 0,5% de citrato de chumbo, por 10 minutos. As amostras foram estudadas e fotografadas em um microscópio eletrônico Phillips em 400.

método estereológico. Dos blocos para microscopia eletrônica, foram obtidos cortes ultra-finos, nos quais cada uma das taxas celulares foram micrografias, com um aumento de 10.500 x. Para a avaliação das fracções volumétricas lisossomas, um retículo ponto foi sobreposto, nas micrografias eletrônicas e o diferencial CON-TEO foi prosseguido pelos perfis das referidas organelas, calculando a fração volumétrica que ocupa, pela seguinte equação:

Para o cálculo da área lisossomal, o software Sigma Scan PRO 5.0 foi usado. Para determinar diferenças estatisticamente significantes, os dados morfométricos foram submetidos ao teste Wilcoxon para amostras não paramétricas.

Resultados

Análise quantitativa. As fracções volumétricas correspondentes aos lisossomos quantificados em tipos de células proliferativas e transformadas são mostradas na Figura 1, evitando que há uma diferença clara na taxa de mecanismos endociticíticos e autofágicos em cada célula. Ainda mais, quantificou, quantificado e submeteu todos os resultados obtidos para o teste estatístico de Wilcoxon para amostras não paramétricas, com 95% de confiança e um erro de 5%, considerando um p = 0,42 e 0,43 e considerando que este teste estabelece diferenças com Valor de Z = em 2.032 e 2.023 para os comprimentos e áreas que os lisossomas (escolhidos por acaso) e no número de organelas avaliadas nas células HC11 GM e HC11 RAS, indicam que há diferenças marcadas, uma situação claramente evidenciada em tabelas I, II e III, respectivamente.

análise morfológica. Os lisosomos escassos pertencentes à célula proliferante são caracterizados por distribuídos aleatoriamente ao longo de seu citoplasma (Figura 2), apresentando uma estrutura basicamente esférica e pequena, destacando a presença de sua estrutura membranosa em torno de um lúmen que pode parecer homogêneo e translúcido como eletrodenses (setas ). Por outro lado, como mostrado na Figura 3, os vários lisossomos encontrados na célula transformada são caracterizados por grande tamanho, organizando em toda a superfície citoplasmática, evitando várias formas circulares e ovóides e cuja característica principal deve ser apresentada como corpos multivesturular em Interior Há restos de produtos de digestão celular (setas).

discussão

Os dados morfométricos apresentados aqui descrevem que as células em processo proliferativo e altamente indiferenciado não têm organelas, uma situação consistente com o que é descrito em 1975 por Junqueira e Salles (8), em O sentido que demonstraram que as células indiferenciadas são praticamente não têm organelas, incluindo lisossomas, cuja tradução funcional neste caso é representada por mecanismos escassos de endociose e autofagia.

Nesta mesma direção Trump e Cois (9), eles já descreveram que o autofagia é um mecanismo característico das células que seguem o curso normal dos processos de diferenciação, abandonando as fases indiferenciada de mera proliferação e crescimento celular.

Por outro lado, transfecção Destas células mamárias através do OnCogene RAS, ela se traduz na cessação imediata da síntese láctea devido ao bloco de f Ator de transcrição do gene de 6 caseína e com a consequente aquisição de um fenótipo neoplásico (10). Esses dados são importantes, uma vez que em 1987 Fawcet (11) descreveu um aumento no número de lisossomos no número de lisossomos como o prazo de lactação, isto é, iniciando o período de involução da glândula mamária, evidências, como nos nossos resultados , um grande número de lisossomos secundários na forma de corpos multivisos-cululados contendo porções de organelas como um retículo endoplasmático granular, mitocôndrias ou grânulos de secreção dentro. Este processo de autofagia teria um objetivo uma eventual remodelação dessas células transformadas.

Nesse mesmo sentido, nossos resultados mostram claramente que os lisossomos sofrem várias modificações com a decoração do mecanismo de transformação, e é evidente um aumento drástico no volume, no número e no comprimento, e nas áreas de Estas organelas. Esses dados são coincidentes com o que é relatado por Trump e Cois (9), que representam que quando as células normais são submetidas a ferimentos sub-les (como transfecção com RAS), são gerados múltiplos processos autofáficos de ativos de ativos de lisossomos.

Visualizar as variações vivenciadas pelos lisossomas com a evolução do mecanismo de transformação, é óbvio que corresponde ao reflexo das alterações no metabolismo das células e, portanto, pode-se concluir que a avaliação desse organelo , Quantificados em células transformadas, expressam aumentos notáveis e, portanto, estes aumentos drásticos em todos os parâmetros quantificados, determinam um marcador sólido do processo de transformação celular neste epitélio mamário (12).

Bibliografia

1. Marte BM, Jeschke M, Graus-Porta D, Taverna D, Hofer P, Gronlet B, et al. O fator de diferenciação da NEU ele-regulina modula o crescimento e a diferenciação das células epiteliais mamárias HC11. MOL Endocrinol 1995; 9: 14-23.

2. Normanno N, Peptídeos relacionados ao Ciardello F. EGF na fisiopatologia da glândula mamária. J mammary Biol Neoplasia 1997; 2: 143-51.

3. Ean S, Wright J, Greenberg A. Determinantes moleculares da transformação metastática. Perseguição ambiental de saúde 1991; 93: 91-5.

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7. Lodish H, Berk A, Zipursky S, Matsudaira P, Baltimore D, Darnell J. Biologia celular e molecular. Editorial médico panorâmico, Madri Spain, 2003, 622-31.

8. Junqueira L, Salles L. Ultrassestutura e Fungao Celular. Editorial Guanabara-Koogan. Rio de Janeiro, 1975, 20-102.

9. Trump B, Berezesky I, Collan e, Kahng M, Mergner W. Rezcent estudos sobre a fisiopatologia da lesão celular da ische-mic. Beitre Pathol 1976; 158: 363-88.

10. O Hynes B, Hynes N, Gronboard B. Ha-Ras e V-RAF oncogenes, mas não Int-2 e C-MyC, interferem na ativação dependente do hormônio lactogênico do fator de transcrição específico da glândula mamária. Crescimento celular difere 1993; 4: 9-15.

11. FAWCETT D. Histology Tratado. Interameri-Cana-McGraw-Hill, 1987, 240-36.

12. Celia N, Cornejo R, Montes G, Hynes N, Chammas R. A Lâmpada de Proteína de Membrana associada à lisossomal é um novo marcador de diferenciação para células epiteliais mamários do rato HC11. Diferenciação 1996; 61: 113-20.

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