Analiza morfometrică a lizozomilor: markeri de transformare celulară a epiteliului mamar

Rev Chil Obstet Gynecol 2009; 74 (2): 83-87

Lucrări originale

Analiza morfometrică a lizozomilor: markeri de transformare celulară a epiteliului mamar

Ricardo Cornejo U. A

Departamentul de Științe de bază, Facultatea de Medicină, Universitatea din Frontera, Temuco.
un biolog celular

Sumar

Fundaluri: transformarea celulelor este mecanismul care rezultă din acțiunea puternică generată de genele transformatoare pe o celulă normală, care, cu expresia consecventă de oncoproteine determină schimbări drastice atât în morfologia și volumele componentelor celulare, generând o celulă cu funcționalitate diferită. Obiectiv: Pentru a specifica modificările care caracterizează mecanismul transferabil în celulele epiteliului mamar transfectate cu RAS Oncoge (HC1RA) comparativ cu tipul său normal de celule (HC11GM). Metodă: Microscopia electronică de transmisie a fost studiată prin aplicarea tehnicilor morfometrice la aceste tipuri de celule, cu accent pe lizozomi, cum-tastarea variațiilor organnelor responsabile pentru digestia celulară. Rezultate: Toți parametrii lizozomi evaluați în tipul de celule transformate prezintă diferențe semnificative față de celula normală. Concluzie: Modificările drastice experimentate de lizozomi se reflectă în achiziționarea de noi funcționalități în celula transformată.

Cuvinte cheie: transformare celulară, lizozomi, morfometrie.

Rezumat

Context: Transformarea celulară este mecanismul de reacție a acțiunii puternice generate de transformarea oncogenei pe o celulă normală, care, cu expresia oncoproteinei subsecțiuni, duce la schimbări drestice în morfologie, precum și în volumele componentelor celulare, generând o celulă cu o funcție diferită Obiectiv: Pentru a specifica modificările care caracterizează mecanismul de transformare în celulele epiteliale mamare transfectate cu oncogena RAS, comparativ cu tipul de celule normale RAS. Metodă: Microscopia electronică de transmisie Utilizarea tehnicilor morfometrice a fost aplicată la aceste tipuri de celule, subliniind variația lizozomilor, încercând să clarifice rolul site-urilor în fiecare metabolism de tip celular. Rezultate: Toți parametrii lizozomali examinați în tipul de celule transformate prezintă diferențe semnificative în ceea ce privește celulele normale. Concluzie: Modificările dansice ale lizozomilor reflectate în achiziționarea de noi cerințe de energie și metabolism în celula transformată.

Cuvinte cheie: transformare celulară, lizozomi, morfometrie.

Introducere

Celule HC11 constituie o linie normală de epiteliul mamar, derivată din linia de comunicare 1D, obținută din glanda mamară de șobolani BALB / C la jumătate de sarcină, care sunt aranjate în contact strâns și formând un epiteliu cubic în strat mono. Aceste celule păstrează caracteristicile diferențierii normale ale glandei și sintetizează 6 cazeină, proteina principală de lapte (1).

Aceste celule mamare normale și în stadiul de proliferare primesc stimularea factorului de creștere epidermică (EGF), Un agent mitogen care se alătură unui receptor de tirozin kinază la nivelul proteinelor citoplasmatice ale membranei plasmatice, o etapă fundamentală în dezvoltarea răspunsului mitogen (2).

În măsura în care introducerea se face în Celulele HC11 de exprimare a proteinei oncogene Ha-RAS acestea presupun proprietăți diferite, dând naștere unui tip de celule modificate și cu caracteristici neoplazice (3,4).

în cursul transformării dintre celule care numai proliferat (HC11 GM) și cei care suferă de variațiile componentelor produsului de acțiune oncogenă (HC11 RAS), funcționalitatea lizozomală dobândește un rol fundamental responsabil o Activități digestive derivate din mecanisme de fag și pinocitoză ca produs al procesului de autofagian (5). În acest context, considerând că lizozomii sunt responsabili pentru procesul degradativ al mediului celular și al citoplasmei (6,7), se pare important să se determine din punct de vedere calitativ și morfologic, variațiile pe care acest organnel prezintă în timpul Mecanismul transformării celulare.

Material și metodă

Microscopie electronică de transmisie. Peletul care conține celule HC11 GM și HC11 RAS s-a adăugat 2% soluție de glutaraldehidă, în 0,15 m tampon fosfat, pH 7,2 și menținut la temperatura camerei timp de 2 ore. Ulterior, el a fost supus unei soluții de spălare de 6 g de națiune și 73 g de zaharoză, dizolvată în 1 litru de apă distilată. Fixarea post-fixare a fost efectuată în soluție de tetroxid de osmiu 1% dizolvată în soluția de spălare descrisă mai sus timp de o oră la 40s C și 0,5% acetat Ura-Nilo, timp de 18 ore.

după spălare, materialul a fost deshidratat în creșterea concentrațiilor de acetonă (30 până la 100%) și incluse în ARALDITA 6005. Au fost obținute tăieturi ultra-subțiri de aproximativ 70 nm grosime, cele care au fost tratate cu acetat de ura – Nil 2% timp de 40 de minute și citrat de 0,5%, timp de 10 minute. Probele au fost studiate și fotografiate într-un microscop electronic Phillips EM 400.

Metoda stereologică. Din blocurile de microscopie electronică, s-au obținut tăieturi ultra-subțiri, în care fiecare dintre ratele celulare au fost micrografate, cu o creștere de 10.500 x. Pentru evaluarea fracțiunilor volumetrice lizozomale, un reticul de punct a fost suprapus, în micrografele electronice și conexiunea diferențială a fost procedată de profilurile organelor menționate, calculând fracțiunea volumetrică pe care o ocupă, prin următoarea ecuație:

Pentru calculul zonei lizozomale, s-a utilizat software-ul Sigma Scan Pro 5.0. Pentru a determina diferențele semnificative statistic, datele morfometrice au fost supuse testului Wilcoxon pentru probele non-parametrice.

Rezultate

Analiza cantitativă. Fracțiunile volumetrice corespunzătoare lizozomilor cuantificați în tipurile de celule proliferative și transformate sunt prezentate în figura 1, evisind că există o diferență clară în rata mecanismelor endocitoritice și autofagice din fiecare celulă. Chiar mai mult, studiat, cuantificat și a prezentat toate rezultatele obținute la testul statistic al Wilcoxon pentru probele non-parametrice, cu încredere de 95% și o eroare de 5%, având în vedere un p = 0,42 și 0,43 și având în vedere că acest test stabilește diferențele cu a valoarea lui Z = la 2,032 și 2,023 atât pentru lungimile și zonele pe care lizozomii (alese din întâmplare) și în numărul de organele evaluate în celulele HC11 GM și HC11 RAS, indică faptul că există diferențe semnificative, o situație evidentă în tabele I, respectiv III și respectiv.


analiza morfologică. Lizozomii limitați aparținând celulei proliferanți sunt caracterizate de distribuite aleatoriu pe tot parcursul citoplasmei sale (Figura 2), prezentând o structură sferică și mică, subliniind prezența structurii sale membranoase care înconjoară un lumen care poate apărea atât omogene și translucide ca și electrodens (săgeți ). Pe de altă parte, așa cum se arată în figura 3, lizozomii multipli găsiți în celula transformată se caracterizează prin mărime mare, aranjând pe toată suprafața citoplasmatică, evitând diferite forme atât circulare cât și ovoid și a căror caracteristică principală este prezentată ca corpuri multivesticulare Interior sunt rămășițe ale produsului digestie celulară (săgeți).

Discuție

Datele morfometrice prezentate aici descriu faptul că celulele din procesul proliferativ și extrem de indiferent nu au organele, o situație care este în concordanță cu ceea ce este descris în 1975 de Junqueira și Salles (8), în Sensul care a arătat că celulele nediferențiate nu au practic organele, inclusiv lizozomii, a căror traducere funcțională în acest caz este reprezentată de mecanisme limitate de endoci-tosoză și autofagie.

în aceeași direcție Trump și COI (9), au descris deja că autofagia este un mecanism caracteristic al celulelor care urmează cursului normal de procese de diferențiere, abandonând fazele nediferențiate ale simplă proliferare și creștere a celulelor.

pe de altă parte, transfecția Dintre aceste celule mamare prin oncogena RAS, se traduce în imediata încetare a sintezei de lapte datorită blocului F Actor de transcriere al genei de cazeină 6 și achiziționarea ulterioară a unui fenotip neoplazic (10). Aceste date sunt importante, deoarece în 1987 FAWCET (11) a descris o creștere a numărului de lizozomi în numărul de lizozomi ca termen de lactație, adică începând cu perioada de involuție a glandei mamare, dovezi, ca în rezultatele noastre , un număr mare de lizozomi secundari sub formă de corpuri multiple-culle care conțin porțiuni de organele ca un reticulum endoplasmatic granular, mitocondriile sau granule de secreție din interior. Acest proces de autofagie ar avea un obiectiv o eventuală remodelare a acestor celule transformate.

În același sens, rezultatele noastre arată clar că lizozomii suferă diferite modificări cu decorarea mecanismului de transformare și este evidentă o creștere drastică atât a volumului, a numărului cât și a lungimii, și în zonele de Aceste organele. Aceste date sunt coincidente cu ceea ce este raportat de Trump și Cois (9), care prezintă că atunci când celulele normale sunt supuse leziunilor sub-lei (cum ar fi transfecția cu RAS), sunt generate mai multe active ale activelor de lizozomi, procesele autofastice sunt generate procesele autofastice.

Vizualizarea variațiilor experimentate de lizozomii cu evoluția mecanismului de transformare, este evident că aceasta corespunde reflexiei modificărilor din metabolismul celulelor și, prin urmare, se poate concluziona că evaluarea acestei organelo , Cuantificat în celule transformate, aceștia exprimă creșteri remarcabile și, prin urmare, aceste creșteri drastice ale tuturor parametrilor cuantificați, determină un marker solid al procesului de transformare a celulelor în acest epiteliu mamar (12).

bibliografie

1. Mars BM, Jeschke M, Graus-Porta D, Taverna D, Hofer P, Gronlet B și colab. Factorul de diferențiere Neu He-regulină modulează creșterea și diferențierea celulelor epiteliale mamare HC11. MOL Endocrinol 1995; 9: 14-23.

2. Normanno N, Ciardello F. Peptide legate de FEG în patofiziologia glandei mamare. J Glanda Mammar Biol Neoplazia 1997; 2: 143-51.

3. Egan S, Wright J, Greenberg A. Determinanți moleculari ai transformării metastatice. Persecuritatea asupra sănătății în timp 1991; 93: 91-5.

4. Hynes N, Taverna D, Citriona M, Stiefel u, Taverna D, Ball R și colab. V-RAF și Ha-Rasoncogenes inhibă transcripția de la promotorul genei beta-cazeină prin suprimarea unui factor de transcripție specific glandei mamare. În: Li J. Carcinogeneza hormonală. Berlin, Springer Verlag, 1993, 164-71.

5. Darnell J, Lodish H, Baltimore D, biologie celulară moleculară. Editorial științifice științifice, New York, 1990; 559-669.

6. Junqueira L, Carneiro J. Biologie celulară și moleculară. Editorial McGraw-Hill Inter-American, Sao Paulo, 1997; 99-101.

7. Lodish H, Berk A, Zipursky S, Matsudaira P, Baltimore D, Darnell J. Biologie celulară și moleculară. Pan American Medical Editorial, Madrid Spania, 2003; 622-31.

8. Junqueira L, Salle L. Ultrastructură și Fungao Cellular. Editorial Guanabara-Koogan. Rio de Janeiro, 1975, 20-102.

9. Trump B, Berezesky I, Collan și, Kahng M, Mergner W. Studii privind restanția asupra patofiziologiei rănirii celulelor Ische-Mic. BEIRE PATHOL 1976; 158: 363-88.

10. Happ B, Hynes N, Gronboard B. Ha-Ras și oncogene V-RAF, dar nu INT-2 și C-Myc, interferează cu activarea dependentă a hormonului lactogenic a factorului de transcripție specific glandei mamare. Creșterea celulară diferă 1993; 4: 9-15.

11. Fawcett D. Histologie Tratatul. Interameri-Cana-McGraw-Hill, 1987, 240-36.

12. Celia N, Cornejo R, Monte G, Hynes N, Chammas R. Lampă de proteine membrane asociate cu lizozomale este un marker de diferențiere nou pentru celulele epiteliale mamare de șoarece HC11. Diferențiere 1996; 61: 113-20.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată. Câmpurile obligatorii sunt marcate cu *